【答案】(1)引物、4种脱氧核苷酸（原料）、（耐高温的）DNA聚合酶（答出两，点即可）(2分)(2)EcoR I和BamHI(2分)(3)作为标记基因（使相关细胞发出绿色荧光，方便进行筛选）(2分)复制原，点(1分)(4)更换培养液(1分)传代培养(1分)离心(1分)(5)检测转基因猪体内的多不饱和脂肪酸(PUFA)是否增加(2分)【解题分析】(1)用PCR技术在体外扩增目的基因时，PCR扩增仪中要加入缓冲液、目的基因、引物、4种脱氧核苷酸（原料）、（耐高温的）DNA聚合酶等。(2)据题图可知，载体有三种限制酶位，点可供选择，目的基因fatl两侧有EcoR I和BamH I两种限制酶的酶切位，点，正好载体上也有这两种限制酶位点，为防止目的基因自身环化使用双酶切，可选用EcoR I和Bam HI切割含目的基因的DNA和载体。(3)构建的基因表达载体中，GFP基因的作用是作为标记基因（使相关细胞发出绿色荧光，方便进行筛选）。基因表达载体必须具备的元件有目的基因、标记基因、启动子、终止子和复制原，点。(4)在培养瓶中培养猪成纤维细胞时，除必须保证环境无菌、无毒外，还必须定期更换培养液，以防止细胞代谢物积累对细胞自身造成伤害。培养到一定程度后，需要分瓶再继续培养，分瓶后的培养过程称为传代培养，此过程中，对于悬浮培养的细胞直接用离心法收集再处理成细胞悬液。(5)转基因猪培育成功的标志是ftl基因在转基因猪体内成功表达，此时能够检测到转基因猪体内具有较高的PUFA含量。

1~5 CCBAB 6~10 ACABB 11~15 CABAC 16~20 IBCBCA

15BAACB6≈10ACCAB